产品货号：
JN0069
中文名称：
T4 DNA聚合酶
英文名称：
T4 DNA Polymerase
产品规格：
50U|250U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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T4 DNA聚合酶具有5'→3'的DNA聚合酶活性，能够在拥有模板和引物的情况下，催化沿5'→3'方向DNA的合成。本酶还拥有单链DNA特异性的3'→5'的外切核酸酶活性，该活性比Klenow片段强100～1000倍，适用于3′突出端的切平。和DNA聚合酶I不同，本酶不具有5'→3'外切核酸酶的活性。
- DNA 3'突出末端的削平；
- DNA 5'突出端的补平；
- 利用较强的3'→5'外切核酸酶活性，通过置换合成从DNA的3'末端进行标记；
- 基因定点突变过程中第二条链的合成；
- 不依赖于连接反应的PCR产物克隆，如LIC载体和插入片段的处理；
- 通过引物延伸法解析mRNA转录的起始点。
在37℃条件下，30分钟内能使10nmol的dNTPs渗入反应成为酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。
| 组分 | 50U | 250U |
| T4 DNA聚合酶(5U/μL) | 10μL | 5×10μL |
| 10×T4DP Buffer | 1mL | 5×1mL |
保存：-20℃
70℃加热10分钟。
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带，PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。
- 使用时将酶置于冰上操作，使用完毕后-20℃保存。
- 需要Mg2+存在才能使酶发挥活性，金属离子螯合剂可抑制酶的活性。
- 反应体系中离子强度超过100mM时，活性将被抑制。
- 易受模板DNA高级结构影响，T4噬菌体基因32编码蛋白可以显著提高聚合酶活性，但3'→5'外切核酸酶活性则完全被抑制。
DNA 3'突出末端的平滑化：
- 将试剂溶化后，在冰上配制如下反应体系：
成分 用量 模板DNA 0.1～4μg 10×T4DP Buffer 1μL dNTPs(10mM) 0.2μL ddH2O 至9μL - 70℃反应5分钟，防止DNA末端退火，然后置于37℃水浴锅中。
- 加入0.2μL T4 DNA聚合酶，轻轻混匀，保温5分钟。
- 用涡旋仪振荡搅拌可使酶失活，如果进行连接反应，最好立即进行。如果不立即进行，应立即进行苯酚/氯仿处理，乙醇沉淀后-20℃保存。
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